本发明公开了一种双层仿生人工骨膜及其制备方法和应用。双层仿生人工骨膜包括仿生生发层和仿生纤维层，仿生生发层以甲基丙烯酰化明胶与纳米羟基磷灰石制备的GelMA‑H‑nHA水凝胶作为生物墨水通过3D打印技术制备。仿生纤维层以甲基丙烯酰化明胶与N‑丙烯酰基2‑甘氨酸制备的P(ACG‑GelMA‑L)‑Mg2+水凝胶作为生物墨水通过3D打印技术制备。本发明骨膜具有双层生物活性仿生、慢速降解、高强度等特点，可保护缺损区，防止纤维组织渗入损伤骨从而阻碍修复疗效，而且其还具有促进成骨、成血管与免疫调节功能，促进缺损区域新骨形成。本发明采用3D打印技术可实现对不规则骨缺损区域形状特异性、个性化的骨膜打印。

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